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糞便基因組DNA提取試劑盒
本試劑盒適合于從各種糞便中提取微生物DNA。對(duì)糞便中各種細(xì)菌、真菌有很好裂解效果，大限度的保留了微生物DNA的多態(tài)性。
使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR 、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟： 使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、稱(chēng)取糞便樣本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成細(xì)粉末，加入450ul 溶液A 震蕩混勻。
* 也可直接稱(chēng)取樣本 0.1-0.5g 于離心管(建議使用 2ml 圓底管)，加入 450ul 溶液 A 劇烈震蕩混勻1-2min 沒(méi)有固體塊。使用液氮研磨效果佳。
2、加入50ul 溶液B 充分顛倒混勻( 不要?jiǎng)×艺鹗?，65℃水浴6min，每2min充分顛倒混勻一次。
3、加入100ul 溶液C 充分顛倒混勻( 不要?jiǎng)×艺鹗?，12000 rpm離心10min 。
4、將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管，12000rpm離心2min 。
5、在吸附柱中加入200ul 溶液D ，將離心后的上清加入到帶有溶液D 的吸附柱中，用移液器吹吸幾次混勻，12000 rpm離心1min。
6、將收集管中的濾出液混勻后重新吸入吸附柱( 必須)，12000 rpm離心1min。
7、倒掉收集管中的廢液，在吸附柱中加入漂洗液500ul，12000 rpm離心1min。
8、倒掉收集管中的廢液，重復(fù)步驟7 兩次(共漂洗三次)。
9、倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管，12000 rpm離心2min 。
10、拿出吸附柱在室溫干燥數(shù)分鐘( 因季節(jié)及氣候等因素不等)，或50℃干燥1min。
11、將吸附柱放入一個(gè)新的離心管中，加入50-100ul 洗脫液(65 ℃預(yù)熱)，12000 rpm離心1min。
12、將離心管中的液體重新加入到吸附柱中，12000 rpm離心1min。離心管中即為糞便微生物DNA 溶液。
注意事項(xiàng):
1、新鮮的糞便樣本會(huì)得到更高的產(chǎn)率，不同樣本在采樣前應(yīng)先查閱相應(yīng)的佳保存條件。
2、若溶液中出現(xiàn)渾濁可在37℃水浴中溶解片刻清澈，不會(huì)影響結(jié)果。
3、在需要吸取上清液的步驟中應(yīng)避免吸到沉淀，否則會(huì)堵塞吸附柱，并影響產(chǎn)物純度。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul ，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；建議使用試劑盒附帶的洗脫緩沖液，用水洗脫也會(huì)損失部分產(chǎn)物；DNA應(yīng)保存在-20 ℃避免反復(fù)凍融，以防降解。
5、液體試劑避免接觸皮膚，若意外接觸應(yīng)立即使用大量清水沖洗。
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