2×RNA Loading Buffer,索萊寶上樣緩沖液,含溴酚蘭、二甲苯青和甘油等,DEPC處理水配制,RNase-free。按4ul樣品加1ul Buffer,混勻直接上樣。
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loading buffer的功能主要有兩個。*,里邊的指示劑溴酚藍和二甲苯氰FF起到指示的作用,顯示電泳的進程,以便我們適時終止電泳;第二,里邊的成分甘油可以加大樣品密度,使樣品密度大于TAE,從而沉降到點樣孔中,防止樣品飄出點樣孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都會寫明。SDS主要是促使聚合酶變性,因為沒有除盡的聚合酶會結(jié)合在DNA雙鏈上影響它的遷移速率。細胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加熱,也是為了中止酶促反應,防止提取的蛋白質(zhì)降解。
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