半胱氨酸(Cys)含量檢測(cè)試劑盒

一、半胱氨酸提取 ： 1、 液體樣品中半胱氨酸提?。喝?0.1mL 液體樣品，加試劑一 0.9mL，充分混勻，11000 rpm 4℃離心 10min，取上清液，待測(cè)。 2、 組織中半胱氨酸提取：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，11000 rpm 4℃離心 10 min，取上清液待測(cè)。 3、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；11000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。二、測(cè)定操作： 1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 600 nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 蒸餾水，500μL 試劑二，500μL 試劑三，混勻后室溫靜置 15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為 A 空白管。 3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)液，500μL 試劑二，500μL 試劑三，混勻后室溫靜置 15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。 4. 測(cè)定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 上清液，500μL 試劑二，500μL 試劑三，混勻后室溫靜置 15 min，于 600nm 處測(cè)定吸光值，記為 A 測(cè)定管。

半胱氨酸含量計(jì)算： 1. 按液體樣品的體積計(jì)算：半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×（V 樣總÷V 樣）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) 2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算：半胱氨酸含量（μmol/g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×（V 樣總÷V 樣）÷W=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷W 3. 按照蛋白濃度計(jì)算：半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]÷（V 樣×Cpr）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷Cpr 4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：氨基酸含量（μmol /10 4 cell）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)] ×（V 樣總 ÷V 樣×細(xì)胞數(shù)量）=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量 C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μmol/mL；V 標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.1 mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL。W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。

半胱氨酸(Cys)含量檢測(cè)試劑盒

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前 1 天，向試劑三中加 5 mL 蒸餾水充分溶解，再加磷酸 1.25mL，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴 2h；冷卻后加 20 mL 蒸餾水，4℃可保存 2 周。標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶，1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Sulfur dioxide derivatives alleviate cadmium toxicity by enhancing antioxidant defence and reducing Cd2+ uptake and translocation in foxtail millet seedlings》 作者:Yansha Han,Mengyang Wu,Lihong Hao,Huilan Yi 期刊:Ecotoxicology and Environmental Safety 影響因子:4.527 PMID:29625394