羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

HYP 是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此 HYP 含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標(biāo)。樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的 HYP，進(jìn)一補(bǔ)被氯胺 T 氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基苯j(luò)ia醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在 560nm 處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液 560nm 吸光值，可計算 HYP 含量。

一、羥脯氨酸提取： 1. 組織：取約 0.5g 樣品于玻璃管，加入 5mL 的組提取液，置于 110℃烘箱，水解 6 12 小時，16000rpm，25℃，離心 20min，用提取液定容 5mL，取上清待測。 2. 細(xì)胞：取約 500 萬個細(xì)胞，加入 2mL 的細(xì)胞提取液，于高壓消毒器中 15 磅保持 30min，自然降壓后待測。二、測定操作：對照管 測定管樣本（mL） 0.2 試劑一（mL） 0.2 0.2 混勻，室溫靜置 20min 試劑二（mL） 0.2 0.2 H2O（mL） 0.6 0.4 混勻，60℃，20min，取出后室溫靜置 15 min，測定 A560。(A560=A 測定-A 對照) 羥脯氨酸含量計算：標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=64.875x+ 0.0251，R 2=0.9991 （1）按組織計算 HYP 含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) =0.385×（A560-0.0251）÷W （3）按細(xì)胞計算： HYP 含量（mg/10 4cell)= （A560-0.0251）÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個） =0.154×（A560-0.0251）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個） V 反總：反應(yīng)體系總體積，1mL； V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.2mL；V 樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質(zhì)量，g。

羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒

組織提取液：6mol/L 鹽酸，自備。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存；細(xì)胞提取液：液體 100mL×1 瓶，4 ℃保存；試劑一：液體 10mL×1 瓶，4 ℃避光保存；試劑二：液體 10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。

 相關(guān)文獻(xiàn)：

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影響因子: PMID:30644571