【實驗天地】DNA提取實驗流程

更新時間：2015-08-19

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1實驗原理

細胞在變性劑的作用下被裂解，同時核蛋白體上的蛋白變性，核酸釋放；釋放出來的DNA和RNA由于在特定PH下溶解度的不同而分別位于整個體系中的水相和中間相，從而得以分離；有機溶劑抽提，沉淀，得到純凈DNA。

2試驗方法

材料準備→破碎細胞，釋放內(nèi)容物→核酸分離、純化→核酸的沉淀或吸附及雜質(zhì)的去除→核酸溶解保存

1.試劑盒提取法

公司產(chǎn)品

D1500 植物基因組DNA提取試劑盒 solarbio 50T/100T 盒 400.00/700.00

2.苯酚氯仿提取法

實驗步驟

① 裂解液（SDS/異硫氰酸胍）、RNAse、蛋白酶K等55～65℃裂解細胞，使蛋白變性，釋放核酸，加入KAc以提高鹽濃度，使蛋白質(zhì)、多糖等沉淀。

② 裂解*后加入一定體積的苯酚-氯仿，混勻后離心取上清；

③ 加入等體積氯仿-異戊醇，混勻后離心取上清水相；

④ 加入定量的異丙醇，使DNA沉淀，加入適量的核酸助沉劑或乙酸鈉以增加核酸的獲得率，離心除去上清；

⑤ 用70%的乙醇洗滌1～2次，加入適量氯化鈉或氯化鋰等去除多糖；(可用PEG代替乙醇，具有去多糖作用)

⑥ 待酒精揮發(fā)*后，用TE緩沖液溶解DNA，保存?zhèn)溆谩?/SPAN>

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3常見問題

4注意事項

① 酚一定要堿平衡。苯酚具有高度腐蝕性，氯仿易燃、易爆、易揮發(fā)，具有神經(jīng)毒作用，操作時應(yīng)注意防護。

② 取各上清時,不應(yīng)貪多,以防非核酸類成分干擾；

③ 乙醇洗滌后要充分晾干，以免影響后續(xù)反應(yīng)；

④ 各操作步驟要輕柔,避免因機械損傷，造成DNA斷裂；

⑤ 為了您的安全，實驗室請帶防護口罩和手套。

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