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Fluo-3, AM
貨號(hào)：S21010
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品說(shuō)明：
CAS：121714-22-5
中文名：鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2- amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
結(jié)構(gòu)式：
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.85
性質(zhì)：
1. 外觀(guān)：紅色粉末
2. 純度：≥90% （HPLC）
3. 產(chǎn)品描述：
Fluo-3, AM是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3 ，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-3 若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm ，大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm 。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm 左右，發(fā)射波長(zhǎng)為 525～530nm 。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
操作說(shuō)明：（for Human T cells）
1，試劑
2 mM 的Fluo-3, AM/DMSO （將1mg Fluo-3, AM 溶于442μL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl， 1mM CaCl2， 0.5mM MgCl2，5mM Glucose，0.1% BSA，pH 7.4 ）
2，操作
（1） 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以防止Fluo-3, AM 在HBSS 中
聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
（2） 用HBSS 稀釋Fluo-3, AM 溶液，制備4μM 的Fluo-3, AM 工作液。
（3） 將Fluo-3, AM 工作液加入細(xì)胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
（4） 加入5 倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
（5） 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞 3 次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成1×105 cells/mL 的溶液。
（6） 37 ℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)506nm，發(fā)射波長(zhǎng)526nm 。

注意：標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類(lèi)而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定佳條件。以上方法僅供參考。