組織學(xué)被定義為對細胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)(顯微解剖學(xué))的科學(xué)研究,其重要組成就是組織的制片和染色觀察。隨著顯微鏡技術(shù)和免疫實驗等的發(fā)展,組織制片切片技術(shù)也得到了廣泛的應(yīng)用,自常用的石蠟切片、冰凍切片中演化出了碳蠟切片、塑封切片、振動切片和超薄切片等等適用于不同實驗需求的制片方式。今天,小編就來帶大家一起了解一下這些切片方式和它們的應(yīng)用方向。
石蠟切片 | 碳蠟切片 | 塑封切片 | 超薄切片 |
石蠟 | PEG | HMMA、GMA | 環(huán)氧樹脂 |
3-8um | 3-8um | 0.5-2um | 50-80nm |
組織結(jié)構(gòu)保存良好,能切連續(xù)薄片,組織形態(tài)清晰,抗原定位準確。 | 具有一般石蠟切片優(yōu)點的同時不經(jīng)過強有機溶劑處理,抗原保存效果較石蠟切片好。 | 包埋塊硬度高,適用于帶入植物組織和未脫鈣骨組織包埋。組織塊保存時間長,切片無需額外處理。 | 是一種特殊的塑封切片,能應(yīng)用于電鏡成像。 |
制片周期較長,組織經(jīng)高溫和有機試劑處理,對抗原保存和酶活性以及脂質(zhì)保存等均有影響。 | 碳蠟熔點低易吸濕,樣本須-20℃干燥保存,展片前避免沾水。 | 制片周期長于石蠟切片,包埋試劑較繁瑣,須專門的切片機切片,染色前須脫塑。 | 制片周期最長,僅用于電鏡掃描樣本制片,制片前須經(jīng)常規(guī)塑封切片定位。 |
冰凍切片 | 速凍切片 | 振動切片 |
OCT | OCT | 瓊脂或水凝膠 |
10-20um | 10-20um | 20-150um |
包埋周期短,抗原及酶活性保存佳。 | 制片周期最短,常應(yīng)用于術(shù)中快速制片,組織抗原表位和活性保存佳。 | 先染色后固定,適用于低細胞密度組織的染色,多用于腦組織。亦可用于免疫電鏡制片前預(yù)定位。 |
需要快速取材,全程低溫處理。處理不當(dāng)易產(chǎn)生冰晶破壞組織形態(tài),樣本相對石蠟包埋樣本而言無法長期保存。 | 操作需使用液氮快速處理,需要一定經(jīng)驗,組織形態(tài)較差,包埋樣本。 | 須專用震動切片設(shè)備和漂片染色板。組織本身未固定未脫水,須小心操作。 |
11111 石蠟切片
常規(guī)染色,組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片。
原因:石蠟切片對組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,并且對抗原基本無影響
如HE染色、結(jié)締組織多色染色、神經(jīng)組織染色、細胞內(nèi)色素以及沉著物染色、DAB顯色、熒光標記染色等均建議優(yōu)先制成石蠟切片。
染色目的 | 染色方法 | 適用樣本 |
常規(guī)形態(tài)學(xué)染色 | HE染色 | 所有動物組織樣本 |
結(jié)締組織多色染色 | Masson三色/改良Masson三色等 | 心、肝、腎、肺、小腸、皮膚等 |
Weigert-EVG復(fù)合染色、victoria-EVG復(fù)合染色等 | 動脈血管、肺、皮膚等 | |
膠原纖維染色 | 改良天狼星紅染色 | 心、肝、腎、肺、皮膚等 |
彈力纖維染色 | Gomori醛品紅/維多利亞藍/weigert品紅等 | 動脈血管、肺、皮膚等 |
網(wǎng)狀纖維染色 | Gomori氨銀染色、Gordon-Sweets氨銀染色等 | 肝、腎等 |
骨組織染色 | 軟骨阿利新藍染色等 | 耳、鼻、喉軟骨,氣管壁、關(guān)節(jié)等 |
軟骨/成骨 番紅固綠染色、goldner三色 | 膝關(guān)節(jié)、下頜骨、鼻梁骨等 | |
成骨茜素紅、Von Kossa染色 | 未脫鈣骨組織、鈣鹽沉積組織如肝、腎等 | |
破骨細胞ACP染色 | 新生發(fā)育/愈傷骨組織(必須EDTA脫鈣) | |
神經(jīng)組織染色 | 尼氏體染色(焦油紫、甲苯胺藍等) | 腦、脊髓 |
髓鞘染色 (牢固藍、變色酸2R等) | 腦、脊髓 | |
神經(jīng)纖維鍍銀染色 | 腦、脊髓 | |
退化神經(jīng)元 FJC染色 | 腦、脊髓 |
例:
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腦組織-尼氏染色-冰凍切片 | 腦組織-尼氏染色-石蠟切片 |
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肝組織-Masson染色-冰凍切片 | 肝組織-Masson染色-石蠟切片 |
2、碳蠟切片
不經(jīng)過脫水透明步驟,對于脂質(zhì)等結(jié)構(gòu)保存效果優(yōu)于石蠟切片,適用于肝臟組織用甲醛鈣固定液固定后的油紅O染色,
3、塑封切片
對于硬度較高的成骨組織鈣鹽染色和較韌的植物組織染色,例如鈣鹽茜素紅染色和植物甲苯胺藍染色,可以考慮制成塑封切片,降低切片難度,從而更好的顯示鈣鹽沉積情況和植物的顯微結(jié)構(gòu)。
4、超薄切片
對于高爾基染色電鏡觀察之前,用于陽性神經(jīng)元部位定位。
5、冰凍切片
脂質(zhì)染色(油紅O染色,蘇丹染色)必須做冰凍切片,使用異丙醇固定(不能使用丙酮固定,會脫脂),經(jīng)多聚甲醛固定后脂質(zhì)會呈空泡狀態(tài)。腦組織NOS酶染色可以先使用PFA-蔗糖溶液固定沉糖脫水后再進行包埋切片。
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脂肪肝組織-油紅O染色-石蠟切片 | 脂肪肝組織-油紅O染色-冰凍切片 |
6、速凍切片
對于不能固定的新鮮組織酶化學(xué)染色,宜采取直接使用液氮速凍、OCT包埋制成切片,大部分酶活均能很好保存下來,如ATP酶染色、ALP染色、ROS染色、β-半乳糖甘酶染色、SDH染色、MAO染色等。
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肺組織-堿性磷酸酶(ACP)染色-石蠟切片 | 肺組織-堿性磷酸酶(ACP)染色-冰凍切片 |
7、振動切片
組織不冰凍,無冰晶形成和組織抗原破壞,在免疫組化染色前避免了組織脫水、透明、包埋等步驟對抗原的損害,能較好地保留組織內(nèi)脂溶性物質(zhì)和細胞膜抗原,主要用于顯示神經(jīng)系統(tǒng)抗原分布研究,如腦組織的高爾基染色。
注意事項
1、需要進行石蠟包埋的組織一般不能冰凍。如果標本已經(jīng)放在-80℃冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片,將標本取出來千萬不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定(在固定液內(nèi)邊解凍邊固定)。
2、組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好程度順序:新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>組織-80℃冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片>組織-80℃冷凍后直接冰凍切片。
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